引物二聚体 引物二聚体和条带怎么区分

如何减少和避免引物二聚体

1、一般情况下，可以通过提高退火温度来降低引物二聚体。如果二聚体非常严重的话，建议重新设计引物。

2、引物二聚体如果不影响产物的形成，是可以忽略的，但如果二聚体过多，导致引物与模板结合的特异性过差，可以用调整PCR体系的手段来解决，比如增加酶活性，减少引物使用量，添加enhancer等等。

3、从PCR反应本身出发，建议适当的减少引物量、提高退火温度；如果是基于PCR产物，最好是挖胶回收，把你的目标片段特异的回收。

引物二聚体会影响酶切结果吗

1、影响不大。探针法没影响，染料掺入法，现在的仪器都自动刷掉那些长度太小的扩增信号。有人说可能对溶解曲线产生影响，不过我做染料掺入法做的少，没试过。

2、是在pcr反应中，两条引物上的互补碱基相结合形成的聚合体，这种聚合体出现了，就相当于原本可以扩增的原料链减少了，即会导致扩增的效率降低，所以最好能避免这种物质的出现。

3、能说一下你这样酶切的目的么？40bp和36bp的条带，只相差4个bp，基本上在琼脂糖胶上就不用考虑分清楚了。

4、KCl浓度K 浓度在50mmol/L 时能促进引物退火。但研究表明，NaCl浓度在50mmol/L时，KCl浓度高于50mmol/L将会抑制Taq酶的活性，少加或不加KCl对PCR结果没有太大影响。明胶明胶和BSA或非离子型去垢剂具有稳定酶的作用。

5、如果担心引物设计问题最好选择报道过的引物，或者请你身边的高手指点。市面上销售的mix，镁浓度都是经过优化的，一般不会影响实验结果，而且你的内参扩出来了，这点应该不会错了。

6、这种二级结构会因空间位阻而影响引物与模板的复性结合。引物自身不能有连续4个碱基的互补。 两引物之间也不应具有互补性，尤其应避免3′ 端的互补重叠以防止引物二聚体(Dimer与Cross dimer)的形成。引物之间不能有连续4个碱基的互补。

引物二聚体可以在凝胶成像中检测出来吗

曝光太强了，你把光圈调小一点，这样曝光会弱一点，就能够去掉背景的白色了。

nanodrop可以测引物二聚体 紫外可见分光光度计基本工作原理和红外光谱仪相似，利用一定频率的紫外可见光照射被分析的有机物质，引起分子中价电子的跃迁，它将有选择地被吸收。一组吸收随波长而变化的光谱，反映了试样的特征。

引物二聚体的出现是必然的，但这或多或少是个问题。电泳时引物二聚体带的缺失并不意味着没有二聚体，而是其含量低，我们肉眼是看不到的。

在做PCR时,出现引物二聚体

1、根本原因应该是RNA纯度不够，导致反转录的cDNA浓度低。

2、引物设计不合理，两条或一条引物的3`端有互补序列，造成自己配对延伸而扩增。建议重新设计引物，或者降低退火温度、增加模板和引物的量试下，不过能不能扩出来看运气了。

3、影响不大。探针法没影响，染料掺入法，现在的仪器都自动刷掉那些长度太小的扩增信号。有人说可能对溶解曲线产生影响，不过我做染料掺入法做的少，没试过。

4、两个原因 反转失败，模板里没有DNA；PCR失败，例如引物不行，退火温度不对等。这也没办法了，你先确定引物能不能从基因组里扩出条带。不过这种情况很可能是反转失败了。

怎样消除引物二聚体

1、从PCR反应本身出发，建议适当的减少引物量、提高退火温度；如果是基于PCR产物，最好是挖胶回收，把你的目标片段特异的回收。

2、有时扩增不出来。为了保证实验的重复性和稳定性，需要尽可能减少引物二聚体的发生。一般情况下，可以通过提高退火温度来降低引物二聚体。如果二聚体非常严重的话，建议重新设计引物。

3、pcr产物回收试剂盒能去除引物二聚体，因为有很好的吸附性。引物二聚体在不同领域中有不同意义，但基本涵义都表示相同或同一种类的物质，以成双的型态出现，可能具有单一状态时没有的性质或功能。

4、如果引物确定了是不同认为消除的，但是你可以设定条件来选择，还有就是自己逐个的检验，直到这几个条件都满足为止。。

5、引物二聚体如果不影响产物的形成，是可以忽略的，但如果二聚体过多，导致引物与模板结合的特异性过差，可以用调整PCR体系的手段来解决，比如增加酶活性，减少引物使用量，添加enhancer等等。